ELISA实验中,同一标本在边缘孔测定的结果明显高于中央孔,且随边缘孔与中心孔的距离增加而明显,该现象为边缘效应。
成因
边缘效应主要是由于板条受热不均引起的,众多周所,聚苯乙烯本身是不良热导体,在孵育操作过程中边缘孔与中心孔存在热力学温度差,同时由于培养箱多次开关及蒸发效应,微孔内液体蒸发程度不同,各孔表面存在光洁度等物理性状的差异有关。
解决方法
对于边缘效应可以通过优化孵育时间,应尽可能使用中央孔及其周围反应孔,同时加样之前按要求将试剂平衡,然后再加,可以考虑使用水浴培养,湿盒孵育、随机样品排布等手段控制其影响,若使用恒温培养箱则孵育过程不要频繁开启培养箱,需要盖好板贴的步骤则盖好板贴,避免污染,理论影响不大。
另外就是在实验中,使用移液枪加入样本的步骤时,注意加样不可太快,要避免加在孔壁上部,不可溅出和产生气泡。
加在孔壁上部的非包被区,易导致非特异吸附。
溅出会对邻近孔产生污染。
出现气泡则反应液界面有差异。
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